Validación de la amplificación isotérmica mediada por bucle de verde malaquita mediante ebullición y centrifugado (B&S MG-LAMP) para la detección de Plasmodium spp.

Abstract

Entre 2022 y 2023, se reportaron 49,405 casos a nivel nacional, destacando la urgente necesidad de métodos diagnósticos accesibles y precisos en áreas con recursos limitados. En este contexto, el presente estudio realizó la validación y evaluación de la técnica B&S MG-LAMP, un método simplificado que combina ebullición y centrifugación (B&S) para la extracción de ADN, seguido de una amplificación isotérmica mediada por bucle con verde de malaquita (MG- LAMP), frente al PCR en tiempo real como técnica de referencia. Para la validación a nivel de laboratorio, se analizaron 50 muestras positivas (confirmadas por PCR en tiempo real para P. vivax o P. falciparum) y 50 muestras negativas, provenientes de comunidades del distrito de Río Santiago, en la región de Amazonas. Posteriormente, se llevó a cabo la evaluación en campo utilizando 252 muestras colectadas en las comunidades del mismo distrito, específicamente en Nueva Esperanza, Chosica y Caterpiza. La amplificación por MG-LAMP se llevó a cabo en un minitermobloque, los resultados fueron interpretados mediante colorimetría y observación visual, considerando evaluadores independientes. Los resultados demostraron que B&S MG-LAMP superó el límite de detección de la PCR en tiempo real, detectando hasta 1 parásito/μL (en comparación con 2.5 p/μL de la PCR en tiempo real) para la identificación de Plasmodium spp. Para la diferenciación de especies (P. vivax y P. falciparum), ambas técnicas lograron un límite de detección de 2.5 p/μL. El método exhibió una sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y valor predictivo negativo (VPN) del 100%, y un acuerdo perfecto (kappa = 1). La evaluación de campo mantuvo una sensibilidad del 100% y una especificidad del 99.15% para Plasmodium spp. y P. vivax, con un VPP del 89.47% y un VPN del 100% para ambos, junto con una alta concordancia (kappa = 0.92). Sin embargo, no se detectaron casos positivos de P. falciparum en las muestras evaluadas, lo que impidió el cálculo de los parámetros diagnósticos para esta especie. Por lo tanto, la implementación de MG-LAMP como herramienta diagnóstica para malaria podría ser clave en zonas endémicas, ya que combina alta sensibilidad para detectar infecciones con baja carga parasitaria, aspecto crucial en áreas orientadas a la eliminación de malaria.